PCR筛选后发现没有目的条带 ,可是我的DH5a菌株是从含Kan的培养基上划线挑选来扩增的,这是为什么?既然是假阳性为什么DH5a还能够在含Kan的培养基上生长呢?

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/28 00:01:53
PCR筛选后发现没有目的条带 ,可是我的DH5a菌株是从含Kan的培养基上划线挑选来扩增的,这是为什么?既然是假阳性为什么DH5a还能够在含Kan的培养基上生长呢?

PCR筛选后发现没有目的条带 ,可是我的DH5a菌株是从含Kan的培养基上划线挑选来扩增的,这是为什么?既然是假阳性为什么DH5a还能够在含Kan的培养基上生长呢?
PCR筛选后发现没有目的条带 ,可是我的DH5a菌株是从含Kan的培养基上划线挑选来扩增的,
这是为什么?既然是假阳性为什么DH5a还能够在含Kan的培养基上生长呢?

PCR筛选后发现没有目的条带 ,可是我的DH5a菌株是从含Kan的培养基上划线挑选来扩增的,这是为什么?既然是假阳性为什么DH5a还能够在含Kan的培养基上生长呢?
可能是里面有带抗性的质粒,但是这个质粒上并没有插入你要的片段哦

存在质粒污染的情况,也可能是你的kana培养基的抗性消失了,也可能是转入了空载体有没有可能是DH5a变异了一般情况下-80保存的感受态细胞是不会发生突变的,变异通常发生在培养阶段,但是若是没有突变诱导条件的话,也不是那么容易发生变异的。所以通常情况下是不考虑变异的。你这样的实验情况的出现我们一般应该考虑感受态制作过程中气溶胶的污染,以至于感受态本身带有抗性。可以做对照实验比对一下,用新配置抗性培养...

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存在质粒污染的情况,也可能是你的kana培养基的抗性消失了,也可能是转入了空载体

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PCR筛选后发现没有目的条带 ,可是我的DH5a菌株是从含Kan的培养基上划线挑选来扩增的,这是为什么?既然是假阳性为什么DH5a还能够在含Kan的培养基上生长呢? 单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀 我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带. PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带 PCR结束后,凝胶电泳检测,发现与目的带不一致的条带,可能原因是什么 用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?我用农杆菌菌斑稀释后跑PCR,电泳有目的条带,提质粒也有,为什么用菌液就跑不出呢?与目的基因连在同一载体上的筛选基因用菌液跑却每次都能跑 PCR目的条带的问题,cDNA模板没有问题,因为我的actin能跑出来.可是我的目的条带一直扩不出来,换了引物还是不管用.用别人肯定扩出来的引物去P,还是没有目的条带.这是为什么啊? PCR产物电泳检测结果点样孔很亮,没有目的条带.是什么原因?marker的条带正常. 关于转基因植株检测的问题我做的是大豆转基因,最近做检测,用328bp的引物做PCR时质粒很正常,可是基因组在328bp左右没有出现条带,而在700bp出现很亮的条带;用35S引物PCR,在目的条带那 PCR跑出的条带与目的条带不同怎么办 RT-PCR只有引物二聚体而没有目的条带怎么办?我已经重新设置引物了 高保真酶PCR没有结果我用高保真酶做PCR的时候没有目的条带,但是同样的条件下用Taq酶条带就很亮,这是为什么呢? 转化后PCR无条带把连接产物连接到T载体之后转化大肠杆菌,用连接产物片段上有而T载体上没有的Kana抗性进行筛选,有转化子长出.培养转化子后PCR,却扩增不出目的条带(即之前的连接产物,约3k PCR后电泳有清晰条带,回收之后酶切,再电泳就没有条带了,怎么回事?PCR后电泳有清晰目的条带,回收之后酶切,再电泳就没有条带了,怎么回事?大概有几种可能性?这个实验本来是别人做的,因为 sscp怎么辨别目的条带和非目的条带我做PCR-sscp,银染之后发现有很多条带,但不知道哪个才是目的条带变性后的结果,有一种条带比较亮,下面还有不是很亮的,而且好像有多态. 我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带!这是为神马?只连这个穿梭载体就已经连了两个月了,我快崩溃了! 琼脂糖凝胶电泳双酶切为什么没有目的基因条带我用的10000的MARKER,我的重组质粒有6000多BP,质粒5300多BP,电泳后发现只有重组质粒的条带和切下来的质粒条带,在1000BP左右并没有发现我目的基因 RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些?