作业帮yeast two-hybrid system检测蛋白质-蛋白质相互作用的原理是什么?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/14 18:40:49
yeast two-hybrid system检测蛋白质-蛋白质相互作用的原理是什么?
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酵母双杂交系统原理
双杂交系统的建立得力于对真核生物调控转录起始过程的认识.细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与.80年代的工作表明,转录激活因子在结构上是组件式的（modular）,即这些因子往往由两个或两个以上相互独立的结构域构成,其中有DNA结合结构域（DNA binding domain,简称为DB）和转录激活结构域（activation domain,简称为AD）,它们是转录激活因子发挥功能所必需的.前者可识别DNA上的特异序列,并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游,转录激活结构域可同转录复合体的其他成分作用,启动它所调节的基因的转录.二个结构域不但可在其连接区适当部位打开,仍具有各自的功能,而且不同两结构域可重建发挥转录激活作用.酵母双杂交系统利用杂交基因通过激活报道基因的表达探测蛋白-蛋白的相互作用.单独的DB虽然能和启动子结合,但是不能激活转录.
而不同转录激活因子的DB和AD形成的杂合蛋白仍然具有正常的激活转录的功能.如酵母细胞的Gal4蛋白的DB与大肠杆菌的一个酸性激活结构域B42融合得到的杂合蛋白仍然可结合到Gal4结合位点并激活转录.双杂交系统的另一个重要的元件是报道株.报道株指经改造的、含报道基因的重组质粒的宿主细胞.最常用的是酵母细胞,酵母细胞作为报道株的酵母双杂交系统具有许多优点①易于转化、便于回收扩增质粒；②具有可直接进行选择的标记基因和特征性报道基因；③酵母的内源性蛋白不易同来源于哺乳动物的蛋白结合.一般编码一个蛋白的基因融合到明确的转录调控因子的DNA-结合结构域（如GAL4-bd,LexA-bd）；另一个基因融合到转录激活结构域（如GAL4-ad,VP16）.激活结构域融合基因转入表达结合结构域融合基因的酵母细胞系中,蛋白间的作用使得转录因子重建导致相邻的报道基因表达,从而可分析蛋白间的结合作用.